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病毒脑区注射实验方法总结

 

         对于动物体内实验,想要达到预期实验效果,所需病毒量一般都比较大。不同的注射部位,不同的感染方式,所需要的病毒注射量和体积都不一样。一般而言,用于动物在体注射的病毒,慢病毒小鼠一般需要5x108PFU的病毒,而大鼠一般要1x109PFU,腺病毒则需要达到1x1011PFU。

 

         不同的种属,不同的注射部位,需要注射不同的病毒总量以达到效果,因此,根据病毒的大致使用量,除以滴度,可以得到需要注射的病毒体积。然而,更多的时候,动物目的部位所能容纳的体积有较高的要求,而这也是注射的时候往往容易被忽略的问题。不同的注射部位和方式,注射体积不一样。比如脑区只能接收极小体积(1-5ul)的注射体积,尾静脉为100-500ul,而腹腔则可以接受ml级别的病毒注射量。下面我们将大小鼠不同部位的病毒注射操作方法和所能注射的体积进行总结一下。

 

         本技术文件讨论脑区病毒注射,其他相关的动物体内实验请参考汉恒的其他相关技术文件,详情登录汉恒官网almabcn.com或电话咨询汉恒生物动物实验技术工程师。

 

脑部注射

 

ZHUSHETIJI:XIAOSHUBUCHAOGUO2ul,DASHUBUCHAOGUO5ul[1,2,3]

操作方法:

1、脑室注射

大鼠:经腹腔注射10%的水合氯醛(0.4g/kg体重)麻醉后,固定于脑立体定位仪上[4],头顶部去毛,消毒皮肤,头顶部正中切口,暴露前囟,按大鼠脑立位图谱,向实验组大鼠第三脑室注射病毒,脑室立体定向坐标为:AP=-1mm,VD=4.5mm;微量注射器自脑表面垂直进针2.6mm。

小鼠: 用0.2mL0.4%戊巴比妥钠麻醉小鼠,将小鼠固定在定位仪上[5],剪开头顶部皮肤,酒精棉擦拭,暴露出前囟。采用右侧脑室定位,自前囟向后2mm,矢状缝旁开1.5mm处,即为侧脑室的体表部位。用微量注射器在此位置穿一小孔,深度为颅骨表面向下2.5mm处[1],快速恒速注射。

2、海马注射

大鼠:,Volume 7,Article 43,1.

[8] Mi-La Kim, Shengjun Han, Sat-Byol Lee, Jung Hye Kim, Hee Kyung Ahn, Youngbuhm Huh. Evaluation of recombinant adenovirus-mediated gene delivery for expression of tracer genes in catecholaminergic neuronsAnat Cell Biol2010 43:157~164.

[9] Paul A. Lapchak ), Dalia M. Araujo, Dana C. Hilt, Jackie Sheng, Shoushu Jiao. Adenoviral vector-mediated GDNF gene therapy in a rodent lesion model of late stage Parkinson’s diseaseBrain Research 1997 777:153–160.

Chinese, Simplified
 
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